安化黑茶提取物抑制小鼠結(jié)腸炎癥的實驗研究

安化黑茶提取物抑制小鼠結(jié)腸炎癥的實驗研究

11閱讀 2019-03-29 02:13 功效


安化黑茶是采用湖南雪峰山脈茶區(qū)大中葉群體品種的鮮葉,經(jīng)過殺青、揉捻、渥堆、松柴明火干燥等四大工藝加工而成,具有色澤黑褐油潤,滋味醇和或微澀,湯色紅明艷亮,略帶獨特松煙香品質(zhì)特征的毛茶及以其為原料蒸壓成形的緊壓茶總稱。


研究表明:

安化黑茶具有多種對人體有益的保健功能,而這些生理保健功效主要是由茶多酚、茶多糖及茶色素等起著主要作用。安化黑茶的生理保健功能被人們所熟知,例如抗氧化、清除氧自由基、降脂、調(diào)節(jié)脂代謝、降糖、調(diào)節(jié)糖代謝、保護心血管、抗腫瘤作用、抗菌抑菌作用等生理活性功能。


最新研究報道,安化黑茶提取物有可能還具有生理抗炎的作用,但是具體作用機理機制暫時處于初級研究階段。炎癥性腸病(inflammatory bowel diseases,IBD),廣義的解釋包括各種的腸道炎性疾病,一般來說是累及回腸、直腸、結(jié)腸這些的都可以稱作炎癥性腸病,它的表現(xiàn)一般都是腹瀉、腹痛,甚至有些人可以出現(xiàn)血便的癥狀。炎癥性腸病主要包括,潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)和克羅恩病。潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種能夠致使直腸和/或結(jié)腸發(fā)炎并可以伴隨潰瘍的疾病,具體發(fā)病原因還不明確,但已有研究證實促炎和抗炎細胞因子的分泌失衡,在UC發(fā)病及病情發(fā)展中產(chǎn)生著重要的作用。

本文研究對象為安化黑茶,

通過建立葡聚糖硫酸鈉(dextran sulphate sodium,DSS)誘導(dǎo)的ICR小鼠結(jié)腸炎模型,探討安化黑茶對腸炎的潛在保護作用及分子機理研究,為功能性食品的開發(fā)提供科學(xué)的理論基礎(chǔ)。安化黑茶對DSS誘導(dǎo)ICR小鼠結(jié)腸炎的抑制作用ICR小鼠連續(xù)飲用3%DSS 7 d誘導(dǎo)潰瘍性結(jié)腸炎,用安化黑茶提取物灌胃,評估安化黑茶的抗炎作用。實驗中可以觀察到DSS組小鼠體重減輕明顯,毛色暗淡,精神萎靡,其排泄物肉眼可見血性粘液,腹瀉癥狀嚴重,與空白組小鼠DAI評分相比,DSS組小鼠DAI評分明顯提高(p<0.01)。實驗小鼠灌胃安化黑茶提取物后,可以觀察到上述病癥得到明顯的緩解。與DSS損傷組相比,高劑量安化黑茶提取物和低劑量安化黑茶提取物組的小鼠均能緩解ICR小鼠體重的下降,降低糞便隱血發(fā)生率,減少腹瀉次數(shù),且高劑量濃度安化黑茶提取物組作用效果更加明顯。DSS組小鼠結(jié)腸腸壁明顯增厚,腸粘膜出現(xiàn)嚴重的充血、水腫;相對于對照組,小鼠結(jié)腸長度明顯縮短(P<0.01);相對于對照組,髓過氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和丙二醛(malonaldehyde,MDA)活性明顯增高,而安化黑茶提取物灌胃的兩個濃度組小鼠MPO和丙二醛濃度明顯下調(diào)(p<0.01);同時,安化黑茶提取物灌胃小鼠結(jié)腸壁未有明確增厚和結(jié)腸黏膜充血癥狀得到有效的改善。

實驗說明:

安化黑茶可以改善潰瘍性結(jié)腸炎小鼠免疫系統(tǒng)紊亂,降低結(jié)腸組織中MPO和MPO的含量,減少小鼠結(jié)腸炎癥組織的損傷。相對于對照組小鼠,DSS組小鼠結(jié)腸組織炎癥因子TNF-α、IL-lβ和IFN-y mRNA的相對表達水平明升上升,而補充安化黑茶提取組小鼠結(jié)腸這些炎癥因子則受到明顯抑制;采Western blot技術(shù)分析小鼠結(jié)腸炎癥因子蛋白表達水平,其結(jié)果與RT-qPCR技術(shù)分析結(jié)果基本一致;進一步采用免疫組化技術(shù),確定補充安化黑茶提取組小鼠結(jié)腸組織炎癥因子表達下降,提示安化黑茶能抑制DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥組織炎癥因子的表達。安化黑茶抑制LPS誘導(dǎo)巨噬細胞的炎癥及炎癥因子表達巨噬細胞RAW264.7在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的炎癥體外模型,采用安化黑茶提取物處理,在細胞水平確定其是否具有抗炎作用及可能的分子機理。安化黑茶對LPS誘導(dǎo)RAW264.7細胞毒性影響。不同濃度的安化黑茶提取物處理RAW264.7細胞24 h后,發(fā)現(xiàn)各組細胞數(shù)量排列密集,形狀呈梭狀,生長狀態(tài)良好,細胞狀態(tài)無明顯差異。采用MTS法檢測對照組,安化黑茶組OD值之間無顯著差異(p>0.05)。說明0~100μg/mL范圍內(nèi),安化黑茶提取物對RAW264.7細胞無明顯的細胞毒性,對其生長、狀態(tài)及活性無影響,可用于后續(xù)實驗研究。安化黑茶對LPS誘導(dǎo)RAW264.7細胞炎癥因子表達的影響。分別采用RT-qPCR和Western blot比較各組細胞炎癥基因表達差異。相對于對照組,LPS組細胞促炎因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ的mRNA表達量和蛋白表達明顯上升;相對于LPS組,安化黑茶提取物能夠明顯降低炎癥因子的表達,且呈明顯的量效關(guān)系。安化黑茶對LPS誘導(dǎo)RAW264.7細胞中轉(zhuǎn)錄活性的影響。核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear transcription factor-KB,NF-κB/p65)是調(diào)控炎癥因子表達的重要轉(zhuǎn)錄因子,TNF-α、IL-1β和IFN-γ基因啟動子區(qū)域均存在一個或多個NF-κB的結(jié)合位點。分別利用熒光素酶報告基因技術(shù),研究安化黑茶對NF-κB活性的影響。


? ? 結(jié)果發(fā)現(xiàn):與對照組相比,LPS誘導(dǎo)組細胞NF-κB相對熒光素酶活性(relative fluorescence intensity,RLU)顯著升高;而安化黑茶提取物組細胞中RLU值顯著減少,呈劑量依賴性,提示安化黑茶提取物可能通過抑制NF-κB的活性,從而抑制炎癥因子表達。

綜上所述,

安化黑茶提取物對DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎癥具有抑制作用,它能明顯改善小鼠的炎癥癥狀;安化黑茶提取物能下調(diào)關(guān)鍵炎癥因子TNF-α、IL-lβ和IFN-γ的表達,其作用的分子機理可能與安化黑茶提取物抑制NF-κB的活性相關(guān)。


資料來源:中南林業(yè)科技大學(xué)碩士學(xué)位論文

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